1 ชุดอุปกรณ์จะถูกติดตั้งที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที โลชั่นเข้มข้น 20 เท่าจะผสมรวมกับ 20 เท่า
น้ำปราศจากไอออนหรือน้ำกลั่น
2 เติมสารเจือจางตัวอย่าง 100μL μ L และ 5μL ตัวอย่างลงในช่องทดสอบแต่ละช่องค่อยๆผสมให้เข้ากันโดยเว้นว่างไว้ช่องหนึ่ง
การอ้างอิงโดยไม่มีของเหลว ; มีบ่ออ้างอิงทั้งบวกและลบสองบ่อเพิ่มเซรั่มอ้างอิงเชิงบวกและลบ
อ้างอิงเซรั่มตามลำดับ 100μL / เอ่อ หลังจากใส่ฟิล์มกันรั่วซึมแล้วให้วางกล่องในอ่างน้ำ 37 ° C หรือ
อุณหภูมิคงที่สำหรับอบนมและฟักตัวเป็นระยะ 30 นาที
3 ทิ้งฟิล์มปิดผนึกและล้างแผ่นปิดด้วยเครื่องซักผ้าหรือมือเพื่อให้มีการเติมน้ำในบ่อแต่ละหลุม
น้ำยาล้างจานไม่มีน้ำล้น ( ประมาณ 300 μL ) เวลาแช่น้ำคือ 10 วินาทีแผ่นความร้อนจะถูกล้าง 5 ครั้ง
และสุดท้ายในกระดาษดูดซับจะแห้ง
4 เติม 100μL น้ำยาอ้างอิงเอนไซม์ที่กำลังใช้งานอยู่ในแต่ละบ่อ ( ยกเว้นบ่อเปล่า ) หลังจากปิดผนึกแล้ว
ให้วางกล่องในอ่างน้ำ 37 ° C หรือใส่ในอุณหภูมิคงที่และฟักออกมาเป็นเวลา 30 นาที
5 เช่นเดียวกับขั้นตอนข้างต้น 3 ให้ล้างจานและผึ่งให้แห้ง
6 เติมสารละลายซับสเตรต 50μL และสารละลายทำสีลงในแต่ละช่องตามลำดับค่อยๆเขย่าและผสมให้เข้ากัน หลังจากนั้น
ติดฟิล์มซีลใส่กล่องในอ่างน้ำอุณหภูมิ 37 ° C หรือใส่สารเพิ่มอุณหภูมิคงที่และฟักตัวเป็น 10
ในความมืดหนึ่งนาที
7 นำฟิล์มปิดผนึกใส่สารละลาย 50μL รอยจุดลงในช่องใส่แต่ละช่องค่อยๆเขย่าเบาๆให้เข้ากันวัดค่า OD ด้วย A
เครื่องอ่านแผ่นไมโครเพลทที่ความยาวคลื่น 450 nm ( ปรับเป็นศูนย์ด้วยบ่อเปล่า ) และพิมพ์ผลลัพธ์ออกมา
ผลลัพธ์ :
1 ค่า OD ของตัวอย่าง≥ค่า Cut Off ให้พิจารณาเป็นค่าบวกค่า OD ของตัวอย่าง < ค่า Cut Off ซึ่งตัดสินว่าเป็นค่าลบ 2 Cut Off=60 3.1 × ค่าเฉลี่ย OD ของการอ้างอิงลบ ( เมื่อค่าเฉลี่ย OD ของค่าลบคือ < 0.05
คำนวณเป็น 0.05 เมื่อค่า OD เฉลี่ยที่เป็นลบคือ ≥0.05 จะถูกคำนวณเป็นค่าจริง )
3 ในสถานการณ์ปกติค่าลบ < 0.10 ค่าบวก≥ 1.0
ซัพพลายเออร์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้ว 
